網 站
反 饋
網 站
指 南

聯系生工

有任何問題,請聯系技術部門或銷售辦事處

聯系技術 聯系銷售

生工生物&AMBiotech X-Aptamer核酸適配體服務平臺

 

技術支持


電話:021-37772245
郵箱:service7@sangon.com

服務簡介

1

核酸適配體(Aptamer)或核酸適體是一類具有特異性識別功能的單鏈DNA或者RNA核酸分子,其作用本質是核酸分子折疊形成特定三維結構而與生物靶標高親和力和高特異性結合,具有與單克隆抗體相媲美的親和力與特異性,同時又具有抗體無法媲美優點:不易受pH、溫度等環境因素影響而變性、價格便宜;可在體外篩選;沒有免疫源性和毒性,可通過化學合成制備、改造與標記;化學穩定性好,能可逆變性與復性、可通過酶擴增、剪切等。這些優點使其在生物醫學領域具有廣闊的應用前景,因此在基礎研究及應用研究領域均呈現了快速發展的趨勢。而傳統的適配體篩選方法是通過隨機序列文庫分子與靶標孵育結合后,經過分離,再擴增再結合,通過10~15輪的篩選,甚至更多輪的篩選,耗時耗力,而且成功率只有30%左右。

生工生物專注于上游核酸適配體文庫的合成與篩選,為主動搶占科研領域制高點,積極尋求國際合作機遇,經過對全球適配體篩選服務公司的精心考察與分析,2018年生工生物決定與美國AM生物有限公司達成戰略合作聯盟,引進AM生物公司的高親和力修飾適配體篩選試劑盒,共同建立高質量的核酸適配體篩選平臺,為廣大科研工作者提供更加高效、高質量的適配體篩選服務及高親和力核酸適配體。美國AM生物公司開發的高親和力修飾適配體(以下用X-Aptamer表示)篩選試劑盒提供了一種快速篩選高親和力修飾適配體的方法,獲得多項發明專利:

2
  • US 7,576,037 Bead library synthesizer
  • US 7,910,523 Bead-based selection process
  • US 7,338,762 Bead-based selection methods
  • AU 2003304278 B2 Bead-based combinatorial oligonucleotide library
  • Canada 2,526,690 Bead-based selection methods and system
  • EPO 1635765 Bead-based selection methods and system
  • US 13/014,597 (pending) System for selecting affinity reagents using oligos attached to beads by non-cleavable linker

說明書下載

高親和力修飾適配體篩選X-Aptamer試劑盒I
高親和力修飾適配體篩選X-Aptamer試劑盒II

X-Aptamer核酸適配體篩選平臺優點

X-Aptamer篩選試劑盒與傳統適配體篩選比較

內容 傳統適配體庫 X-Aptamer X-Aptamer優點說明
庫容量 1014~20 109 傳統隨機庫中絕大多數都是無效序列,X-Aptamer是經過計算機分析舍棄無效序列,保留具特異空間結構序列,大大減輕了篩選負荷。
每條序列的重復數(以2OD計算) 0~101 105 因為傳統隨機庫庫容量過大,每種堿基序列在0~10條,豐度極低,很難富集,必須要進行多輪篩選。
堿基修飾 X-Aptamer含有新穎的化學修飾,包括二硫代磷酸酯骨架修飾、脫氧核糖核酸、正電修飾及氨基酸側鏈修飾,從而使與靶標的親合力增強上百倍,甚至上千倍。
一次篩選靶標數量 1個 3~5個 X-Aptamer 正是由于上述的三大特點,可以一次性同時進行5個靶標的篩選,提高篩選效率。
篩選循環數量 10~15輪 1輪篩選+1輪結合 一輪靶標分子與X-Aptamer庫篩選,二輪靶標與特異性適配體結合pull-down分離,操作簡單、省時省力。
篩選成功率 30% 70% 由于X-Aptamer庫含有多種堿基修飾,其空間結構多樣性及親和性增強,大大提高了篩選成功率。
序列分析 一代或二代測序得堿基序列 二代測序+專業軟件 通過標記引物得出多個靶標適配體序列,并通過AM的云端智能軟件分析出修飾的適配體核酸序列。

X-Aptamer 模式圖及修飾堿基

3 4

X-Aptamer 與無修飾適配體親和力比較

Target Regular Aptamer KD, unmodified Modification Made X-Aptamer KD, modified Binding Affinity Enhancement
VEGF165 2.1 nM PS2 15 pM 140x
FS2 2.3 pM 913x
α-Thrombin 1.1 nM PS2 1.2 pM 916x
α-Thrombin 2.4 nM T-indole 1.4 pM 1700x
IgE 11.3 nM PS2 10.4 pM 1000x

相關文獻

  1. [1] Lokesh G.L. et al. (2017) X-Aptamer Selection and Validation. In: Bindewald E., Shapiro B. (eds) RNA Nanostructures. Methods in Molecular Biology, vol 1632. Humana PressLink

  2. [2] HongyuWang, Curtis H.Lam, XinLi, Derek L.West, XianbinYang, Selection of PD1/PD-L1 X-Aptamers. Biochimie, Biochi. 2017.09.006Link

點擊鏈接查看更多

5

服務流程

目前生工生物可提供兩種服務方式,客戶篩選和生工篩選。您可選擇把靶分子寄給生工,由生工進行后續一系列的篩選、分析及適配體合成等一條龍服務;也可選擇自行購買該試劑盒篩選,并將得到的PCR產物寄給生工做后續的相應服務。服務流程圖如下:

客戶篩選:

客戶從生工購買AMBiotech X-Aptamer篩選試劑盒→客戶自行篩選→篩選到PCR產物→寄到生工進行二代測序→AMBiotech數據分析→生工合成X-Aptamer→特異性及親和力分析

生工篩選:

客戶寄靶分子給生工→生工篩選→篩選到PCR產物→二代測序→AMBiotech數據分析→生工合成X-Aptamer→特異性及親和力分析

服務說明

  1. 1. 本試劑盒主要針對蛋白和小分子靶標,并且靶標能進行穩定標記;
  2. 2. 對于細胞,或混合靶標需要客戶自己摸索相關的篩選條件;
  3. 3. 客戶自己篩選直接購買試劑盒,如需要公司幫助篩選,需要客戶提供詳細的蛋白信息;
  4. 4. 蛋白及小分子干粉樣品帶普通冰袋運輸,溶液樣品需要干冰運輸。
6
X-Aptamer試劑盒實驗流程圖

服務價格與周期

服務內容 單價(元) 周期
X-Aptamer kit I(需要自備蛋白標記試劑等) 詢價 3天
X-Aptamer kit II(無需自備試劑) 詢價 3天
X-Aptamer 篩選服務 詢價 2~4周
二代測序 詢價 5~8天
數據分析及適配體合成(50nmol/個) 詢價 4~6周
EMSA特異性分析 詢價 1~2周
QPCR親和力分析 詢價 2~3周

客戶提供

提供樣品

靶蛋白或小分子靶(應使用適當的生物素、組氨酸或其他合適的物質示蹤或標記。在很多情況下,重組的靶蛋白已經含有谷胱甘肽-S-轉移酶(GST)或組氨酸等標記,這樣靶蛋白就不需要標記。)

如客戶自行篩選后續還需要提供PCR產物。

提供信息

X-Aptamer高親和力修飾適配體服務訂單下載

最終交付

交付報告

特異性及親和力分析報告

老鸭一级片